技術服務

細胞培養中常見的污染情況及解決方法


1. ** :**在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染**的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。

解決方法 :仔細檢查一下器皿的**情況,是否在高壓**時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品,連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象!可在培養液中加相應的***處理,如四環素,慶大霉素,或者鏈霉素。


2. 霉菌 :培養液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之后,細胞的活力狀態變差。

解決方法 :用硫酸銅溶液擦拭CO?孵箱內,再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的**磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。


CO?孵箱被霉菌污染后,可把所有細胞暫時轉移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節。


其它培養箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。


預防霉菌污染,可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗;但細胞一旦污染,很難挽救,制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補,建議舍棄該污染細胞。,將環境徹底**,如果所有細胞都污染,可能是系統污染,檢查一下培養基和器材,如果只是個別污染,可能是操作問題,就要注意操作。


3. 支原體 :黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中*常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。

解決方法 :支原體污染細胞后,特別是重要的細胞株,有必要**支原體,常用方法有:***處理、抗血清處理、***加抗血清和補體聯合處理。要注意的是:支原體沒有細胞壁,故作用于細胞壁生物合成的***,如內酰胺類、萬古霉素等是不敏感的;對多粘菌素、利福平、磺胺**普遍耐火藥。對支原體*有抑制活性***是四環素類、大環內酯類等,氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養用物。通常,濾過**的方法對支原體是沒有作用的。


4. 黑蛟蟲 :可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。

解決方法 :對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。


5. ** :一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些**開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。**生長的比較慢,不象**那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。

解決方法 :果斷扔掉,然后徹底****培養間, CO?孵箱,器皿和培養液。


6. 原蟲 :培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。它們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的,但它們的數量小,細胞占優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當它們到達一定的數量時就會影響到 細胞 的生長,*終形成惡性循環。

解決方法 : 污染的可能原因很多,比如配液**問題、操作問題、環境問題等等,如果細胞很多的話,直接扔了重新復蘇細胞,如果是保種細胞的話,可購買相關的**試劑。


污染的可能原因:可能原因很多比如配液**問題、操作問題、環境問題等等 。


關于培養基的無菌狀況,取培養基至培養瓶中(不加細胞),37度試培養一段時間后觀察。如果沒有**生長 就是操作的問題。 


也可以在培養基中事先加入雙抗(硫酸鏈霉素和氨芐青霉素)。但雙抗有時會影響細胞的狀態,所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結果。  


1、孵箱應定期用三氧機** 或者 紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水 

2、超凈臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素 

3、超凈臺的風機不能過大,風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染 

4、無菌室經甲醛熏蒸**后,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時即可進入操作。


聯系我們
產品搜索

細胞系,ATCC細胞,ATCC菌種,細胞系目錄,ATCC,鼠傷寒沙門氏菌,atcc細胞庫,人淋巴瘤細胞,人食管癌細胞,ATCC 19404,ATCC 25922,ATCC 19146,微生物菌種,細胞株,標準菌株,ATCC中國,atcc上海代理,CMCC 菌株,ATCC菌株,細胞目錄,質控菌株,腫瘤細胞株,乳腺癌細胞系,人肝癌細胞系

產品目錄

Copyright? 2003-2020  上海復祥生物科技有限公司版權所有            電話:021-35080510
傳真:021-35080520    地址:上海市虹口區赤峰路630號南雁大廈1901室    郵編: 滬ICP備10013034號  
  

滬公網安備 31010902002429號

上海股票指数